如何正確使用Roche 480配套PCR板?避免交叉污染與信號干擾的實操指南

　　以下是天津本生使用Roche 480配套PCR板時避免交叉污染與信號干擾的詳細操作指南：

　　一、實驗前準備?

　　耗材選擇?

　　必須使用與LightCycler® 480匹配的96孔PCR板(推薦半裙邊白色板)。

　　選擇專用光學封板膜，確保密封性并減少熒光背景干擾。

　　滅菌處理?

　　新開封的PCR板需紫外線照射15分鐘或高壓滅菌(若材料允許)。

　　操作臺和移液器需用75%乙醇擦拭消毒。

　　二、反應(yīng)體系配置?

　　加樣規(guī)范?

　　反應(yīng)液需在冰上配制，避免高溫降解。

　　每孔體積嚴格控制在20μL(誤差<1μL)，使用低吸附吸頭分裝。

　　防污染措施?

　　分區(qū)操作：核酸提取、體系配制、PCR擴增需在不同超凈臺進行。

　　每加樣一次更換吸頭，避免氣溶膠污染。

　　三、封板與離心?

　　密封操作?

　　封膜時需覆蓋孔口，輕壓邊緣排除氣泡。

　　禁止使用記號筆在板或膜上標記(可能干擾熒光信號)。

　　離心參數(shù)?

　　2000 rpm離心30秒，確保液體集中至孔底。

　　四、儀器操作?

　　裝板注意事項?

　　確認板底清潔干燥，避免指紋或灰塵影響光學檢測。

　　放入儀器時對準托架卡槽，避免傾斜。

　　程序設(shè)置?

　　熱蓋溫度設(shè)為105°C，防止蒸發(fā)。

　　熒光采集通道需與染料匹配(如FAM通道用于SYBR Green)。

　　五、實驗后處理?

　　數(shù)據(jù)保存?

　　使用光盤刻錄原始數(shù)據(jù)，避免U盤傳輸導(dǎo)致文件損壞。

　　耗材廢棄?

　　PCR板為一次性使用，禁止剪開重復(fù)利用。

　　實驗結(jié)束后立即帶離實驗室，按生物危害廢物處理。

　　關(guān)鍵問題規(guī)避?

　　交叉污染?：

　　操作全程佩戴無粉手套;

　　每批次實驗預(yù)留至少2孔陰性對照。

　　信號干擾?：

　　白色PCR板可減少背景熒光;

　　避免強光直射反應(yīng)板。

　　通過規(guī)范操作流程和嚴格分區(qū)管理，可顯著提升實驗結(jié)果可靠性。

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　　注：以上資料僅供參考，具體請咨詢技術(shù)老師。

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